細胞培養(yǎng)-細胞計數(shù)詳細步驟及方法
在細胞培養(yǎng)之中，細胞計數(shù)是一項基本技能。對于我們這些剛剛進入實驗室做細胞實驗的人來說，最麻煩的事情就是細胞計數(shù)。雖然它相對簡單，但我們經(jīng)常會頭暈和失明。此外，如果一個人被別人打斷，他的工作每分鐘都會被浪費。事實上，我認為細胞計數(shù)如此困難的很大一部分原因是我沒有掌握正確的　　在我們?nèi)粘嶒炛校毎麑嶒炇敲恳粋€課題都必不可少的一部分。但作為一個科研小白，在面對細胞實驗時總是束手無策，所以我整理了常規(guī)細胞實驗技術，以供大家參考。

問題一：細胞生長緩慢
細胞長得慢是細胞培養(yǎng)過程中比較常見的問題，一般來說，細胞活力和濃度一直是細胞健康的標志，細胞長得慢的話，活力和濃度可能都會直線下降。
造成細胞生長緩慢的主要原因及解決方法：
1，新配置的培養(yǎng)基以及換了新的血清，細胞不適應；解決方法：最好使用最適宜的培養(yǎng)基，如果條件不允許，可以換液時不要全量換液逐漸增加新的培養(yǎng)基比例，1/4、1/2、3/4到1，多傳代幾次，讓細胞慢慢適應。

2，細胞密度不夠有些細胞是細胞依賴性細胞，密度過低生長緩慢；也可能是細胞分泌促生長活性物質(zhì)過少，細胞連接不好等原因。解決辦法：增加細胞接種密度；將細胞從大皿轉(zhuǎn)移至小皿培養(yǎng)；適當增加培養(yǎng)基血清濃度。

3，培養(yǎng)環(huán)境改變細胞培養(yǎng)箱的溫度、CO2、細胞的生存環(huán)境要適宜，一般來說最佳溫度：是37 ℃， CO2:濃度為5% ， pH:為7.2-7.4，還有滲透壓等，大家要注意調(diào)好，不要隨意改變。

4，污染，如支原體，細菌，真菌等解決辦法：細胞污染是多方面的原因，一方面要嚴格無菌操作技術、保持清潔的環(huán)境，另一方面，污染之后要及時鑒別和處理，并且，建議大家使用品質(zhì)良好的細胞株和培養(yǎng)基，這是是減少污染的最好方法。

5，細胞本身狀態(tài)改變，如衰老等解決辦法：沒有可逆的辦法，只能及時更換新的細胞。當然如果培養(yǎng)細胞是原代的話，生長速度是比較緩慢的，如果沒有及時換液，營養(yǎng)成分不夠，細胞也會生長緩慢。用螺旋口瓶培養(yǎng)細胞時，需將瓶蓋微松，以保證通氣，要保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈等。其實只要條件適于細胞生長，細胞在自己的“小房子”里面舒適自由，那么，它一定會長得很快，并且，形態(tài)越來越“漂亮”。

問題二：細胞不貼壁